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布氏杆菌基因试纸卡
2014-10-27  点击数:
商品名称:布氏杆菌基因试纸卡
商品编号:
市场价:¥0.00
优惠价:¥0.00
计量单位:10片/盒
  • 产品描述
  • 应用意义
  • 常用问题
  • 相关产品
【产品组成】
类别
产品组成
规格
核酸提取
核酸提取液
3.6ml×1
磁珠
120μl×1
结合液
5ml×1
洗涤液
7ml×1 瓶
洗脱液
400μl×1 管
1.5ml离心管
10个×1 包
0.5ml离心管
10个×1 包
核酸扩增
扩增液
220μl×1 管
矿物油
400μl×1 管
反应管
10×1 
产物检测
基因试纸卡
10×1
稀释液
15ml×1
对照品
阳性对照
1
阴性对照
100μl×1
【储存条件及有效期】
1.       运输条件:常温运输。
2.       储存条件:2~8℃避光储存。
3.       有效期:6个月。
【仪器及其它物品要求】
1.       恒温装置:快灵控温金属浴。
2.       低速离心机、磁力架、漩涡振荡器。
3.       微量移液器:1~10μl10~100μl100~1000μl量程的移液器及配套的枪头。
4.       其他物品:75%乙醇、匀浆器、计时器。
【原理】
本试剂盒采用了核酸提取、基因恒温扩增、核酸探针杂交及胶体金免疫层析等技术,适用于基层实验室进行快速的基因检测。该产品以目标微生物高度保守核酸区域为靶序列,在反应体系中包含带标记的特异引物与探针,64℃恒温条件下完成核酸的扩增和杂交反应,随后将扩增产物反应管插入防污染防泄漏的试纸卡中,实现不开盖免疫试纸层析定性判定。  
【实验准备】
1.       将核酸提取液,基因试纸卡取出回温至室温,其他试剂均即用即取;核酸提取液若有晶体析出,可在
 56℃水浴中重新溶解,并摇匀后使用。
2.       预冷75%乙醇:将75%乙醇置于4℃冰箱预冷。
3.       首次检测,需设置阳性对照,阳性对照离心1min后,加入30μl洗脱液,吹打6~8次用于后续检测,溶解
 后-20℃保存。
【样品采集与处理】
1.样品采集
1)   组织样本:剖解后采取病变典型组织送检,以淋巴结、扁桃体、肺脏、肾脏、脾脏为主。无菌环境下取待检样本约0.06g,置于无菌的匀浆器中,加入500μl稀释液充分研磨,制备成匀浆液,取样时注意不要吸入未磨碎的组织块。           
2)   血清样本:取2~5ml全血,静置斜放15~20min,充分析出血清后2~8℃冷藏保存。
3)   拭子样本:将棉签拭子在稀释液中湿润后采集口、鼻、眼分泌物。然后将拭子浸泡至含有500μl稀释液的采样管中,充分混匀静置1~2min,取100μl上清液用于后续检测。
2.样品保存与运输:
1) 血清样品可置于2~8℃低温环境中冷藏保存一星期,长期保存放入-20℃,应避免反复冻融。
2) 组织样品取出后,需置于室温下进行降温,再进行冷冻保存,不能直接放入冷冻环境。
3) 样品运输方法:放入泡沫保温箱中运输,视气温情况和运输时间长短加入足够冰袋,最好在24h内送至实验室。
 3. 注意事项
1) 凡怀疑重大烈性传染病,如炭疽、布氏杆菌等不宜解剖的患畜,严禁剖检。
2) 采集病料的种类,根据不同的疫病或检测目的,采其相应的血样、活体组织、脏器、肠内容物、分泌物、排泄物或其他材料。
3) 组织样本的采取,建议剖检活体;如患畜已死亡3h以上,不予采取病料。
4) 采样时应注意安全,做好防护工作,必须戴手套,必要时戴口罩,严防人畜共患病感染。
【各检测项目推荐检测样本】

检测动物
检测疫病
建议采集的病料
畜禽
美洲型猪蓝耳病毒
肺脏、血样、流产胎儿、淋巴结
猪瘟病毒
扁桃体、脾脏、肾脏、淋巴结
口蹄疫病毒
水泡皮液、淋巴液、扁桃体
猪流行性腹泻病毒
猪传染性胃肠炎病毒
猪伪狂犬病毒
脑、扁桃体、血样
猪圆环II型病毒
猪弓形虫
脑、肺脏、抗凝血
小反刍兽疫病毒
淋巴结、肺脏、脾脏、口眼鼻分泌物
禽流感H7亚型病毒
肺脏、喉气管、胸肌、脑、粪便、鸡胚尿囊液
犬猫
 
犬瘟热病毒
口鼻眼分泌物、粪便
犬冠状病毒
粪便、肠内容物
犬细小病毒
粪便、肠内容物
脾脏、肝脏、胎盘、流产胎儿、羊水等阴道分泌物、乳汁
犬、猫弓形虫
抗凝血、猫粪便
钩端螺旋体
肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、尿液
犬腺病毒II型
口鼻眼分泌物

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【操作步骤】
核酸提取
(1)       取对应样本数的1.5ml离心管,作好标记,加入100μl上述处理好的样本液,然后加入300μl核酸提取液,振荡混匀后,室温静置3~5min
(2)       体液、粪便、拭子样本加入400μl结合液(组织样本加入200μl结合液)和10μl磁珠,振荡混匀后,置于磁力架上进行磁分离,并弃净溶液。
注意:磁珠使用前需充分振荡混匀。磁分离时将离心管置于磁力架上15s左右待磁珠被磁力架完全吸附,保持反应管在磁力架上静止,用移液器吸净溶液并弃掉,操作中避免触碰到磁珠团,(3)(4)(5)磁分离,弃净溶液与此步骤操作相同。打开和盖上离心管盖时避免手和手套接触离心管口内侧,以免出现样本间交叉污染。
(3)       加入600μl 4℃冰箱预冷的洗涤液,将离心管从磁力架上取出,振荡混匀后,置于磁力架上进行磁分离,并弃净溶液。
(4)       加入600μl 4℃冰箱预冷的75%乙醇,将离心管从磁力架上取出,振荡混匀后,置于磁力架上进行磁分离,并弃净溶液。
(5)       离心管短暂离心5~10s,置于磁力架上进行磁分离,用100μl枪头弃净溶液。
注意:溶液必须去除干净,否则残留的乙醇会抑制后续扩增反应。
(6)       打开盖子,室温干燥3~5min,使残留乙醇充分挥发。
(7)       加入20~30μl洗脱液并移出磁力架,振荡混匀后,短暂离心5~10s,置于磁力架上进行磁分离,吸取分离溶液至0.5ml离心管中,置于-20℃备用。
注意:吸取分离溶液时不要吸入磁珠,若吸入磁珠,可再次进行磁分离,吸取分离液。
恒温扩增反应
(1)       从干燥筒中取出n+2个反应管(n+2=样本数+阳性对照+阴性对照),做上标记。
注意:本试剂盒提供的阳性对照和阴性对照不需要进行核酸提取,可直接使用。
(2)       在反应管小腔中加入18μl扩增液,吹打2~3次溶解干粉,再加入20μl矿物油;在反应管大腔中450μl 稀释液,反应管盖微合。
注意:扩增液冰箱取出后,需振荡混匀,短暂离心5~10s后使用。
(3)       逐个开盖在反应管小腔底部加入2μl 阴性对照样本、待检样本核酸、阳性对照样本,合盖至完全闭合。
注意:阴性对照核酸应第一个加样,阳性对照核酸应最后一个加样,每管盖上盖子后,进行后一管的加样,以避免样本间交叉污染。
(4)       将反应管置于控温金属浴上,50℃反应2min后,64℃反应1h
注意:在扩增过程中及扩增结束后切不可打开反应管盖,否则实验容易出现假阳性结果。
扩增产物检测
(1)       反应管内溶液恢复到室温后,摇匀反应管大小腔内液体。
注意:溶液若不恢复室温,将导致试纸条C线T线显色变弱。
(2)       取出基因试纸卡,将扩增后的反应管对准样品孔中的凹槽,压入样品孔中,管底断裂,液体流出,若液体没有顺利流出,可将基因试纸卡平行拿起,轻轻敲打桌面几次。
注意:不能让样品孔高于视察窗,液体可能会从管子里直接流下去,导致层析失败。
(3)       3~5min内判读结果。
【结果判定】
1.       阳性结果:待检样本C线和T线都有条带。
2.       阴性结果:待检样本C线有条带,T线无条带。
3.       无效结果:C线、T线无条带出现。
4.       若阴性对照C线和T线都有条带,表明实验出现假阳性结果,需重做实验。
【注意事项】
1.       核酸提取液有轻微腐蚀性,若不慎溅入眼睛或身体其它部位,请立刻用大量清水冲洗后就
 医。
2.       核酸提取和恒温扩增加样操作需戴口罩和手套,特别是RNA病毒,其核酸容易被RNA
  酶降解。
3.       在扩增的过程中及反应结束后切不可打开反应管盖,避免形成气溶胶污染。
4.       基因检测卡为一体式装置,检测完成后切不可将装置强行打开,造成污染。
5.       若条件允许,核酸提取区域和扩增加样区域建议分开,以免出现样本间的交叉污染。
6.       使用过的基因试纸卡建议置于密闭的容器中,并尽快丢弃。
 
操作流程图
基因试纸卡流程图.jpg  

      有了这类产品,畜牧业的疫病专家在养殖场基层实验室能直接进行疫病病原的基因检测。如现场能快速确诊临床病例,对外购的商品畜禽或种畜种禽进行重点疫病的排查检疫,对执行了疫病净化计划的畜禽养殖场做病原的基因筛查。基因试纸卡的灵敏度比胶体金免疫试纸病原检测卡超过近一万倍,达到甚至超过了在国家诸多重点实验室使用的荧光定量PCR方法。快灵生物研发的基因试纸卡产品针对基层单位的使用条件和需求进行了细致研发,能弥补传统的病理解剖分析和免疫学诊断的不准确性,同时较现有病原检测方法极大地缩短了检测窗口期,更早更快地实现疫病的防控。

【注意事项】
1. 核酸提取液有轻微腐蚀性,若不慎溅入眼睛或身体其它部位,请立刻用大量清水冲洗后就
医。
2. 核酸提取和恒温扩增加样操作需戴口罩和手套,特别是RNA病毒,其核酸容易被RNA
酶降解。
3. 在扩增的过程中及反应结束后切不可打开反应管盖,避免形成气溶胶污染。
4. 基因检测卡为一体式装置,检测完成后切不可将装置强行打开,造成污染。
5. 若条件允许,核酸提取区域和扩增加样区域建议分开,以免出现样本间的交叉污染。
6. 使用过的基因试纸卡建议置于密闭的容器中,并尽快丢弃。
【储存条件及有效期】
1. 运输条件:常温运输。
2. 储存条件:2~8℃避光储存。
3. 有效期:6个月。

 

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