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三聚氰胺酶联免疫试剂盒
2014-10-24  点击数:
商品名称:三聚氰胺酶联免疫试剂盒
商品编号:
市场价:¥0.00
优惠价:¥0.00
计量单位:96孔/盒
  • 产品描述
  • 应用意义
  • 常用问题
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1    概述

三聚氰胺俗称密胺、蛋白精,是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。它是白色单斜晶体,几乎无味,对身体有害,不可用于食品加工。
本试剂盒采用竞争酶联免疫法,测定牛奶、奶粉、饲料中的三聚氰胺添加物的残留。
2    原理
样品中的游离三聚氰胺与预包被在板子上的三聚氰胺蛋白偶联物竞争结合酶标记三聚氰胺抗体,通过洗涤洗掉未结合的酶标记三聚氰胺抗体,再通过酶的专一性显色剂显色根据显色的深浅来判断样品中三聚氰胺含量。根据竞争性原理,如果样品中的游离三聚氰胺量少,则酶标记的三聚氰胺抗体与包被在板子上的三聚氰胺偶联物结合的多,显色深,反之,则显色浅。检测时设置标准曲线,通过标准曲线测定样品中三聚氰胺的含量。
3    试剂盒组成
3.1三聚氰胺酶标板:96孔
3.2 三聚氰胺标准品:6瓶(1ml/瓶),分别是:
标准品
浓度ng/ml
0
1
4
16
64
256
3.3 三聚氰胺酶结合物:1瓶(6ml)
3.4 浓缩样本稀释液:1瓶(5×,30ml
3.5 浓缩洗涤液:1瓶(10×,50ml)
3.6 底物液A:1瓶(6ml)
3.7 底物液B:1瓶(6ml)
3.8 终止液:1瓶(6ml)
3.9 说明书:1份
3.10 质检报告:1份
4    需要而未提供的材料
4.1 酶标仪(检测波长450nm,参考波长630nm)
4.2 微量移液器
4.3 前处理所需试剂及相关仪器
5    贮存
5.1 试剂盒贮存于2-8℃,切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
5.3 该产品有效期为12个月
6    注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(20-25℃)。
6.3 不要使用过期试剂盒;不同批号试剂盒中的试剂不得混
用;不同标准品、样品所用吸头不能混用。
6.4 避免所有试剂接触皮肤;混合试剂时应避免起泡。
7    试剂配制
7.1 洗涤工作液:
用去离子水将浓缩洗涤液按1:9体积进行稀释
例如:10ml洗涤工作液=1ml浓缩洗涤液+9ml去离子水
7.2 样本稀释液:
用去离子水将浓缩样本稀释液按1:4体积进行稀释
例如:10ml样品稀释液=2ml浓缩样品稀释液+8ml去离子水
7.3 饲料样本提取液:60%甲醇水溶液
用去离子水将100%甲醇(分析纯)按3:2体积进行稀释
例如:10ml 60%甲醇=6ml 100%甲醇+4ml去离子水
8    样品处理程序
8.1 液态奶
取50µl液态奶于含有450µl样本稀释液的离心管中,充分振荡混匀;取50µl进行检测。 (稀释系数10)
8.2  奶粉
准确称取1±0.01g奶粉样品于50ml离心管;加入5ml去离子水,充分溶解;取100µl于新的离心管中,加入500µl样本稀释液,充分振荡混匀;取50µl进行检测。(稀释系数30)
8.3 酸奶
将酸奶充分振荡混匀并取50µl于含有950µl样本稀释液的离心管中;充分振荡混匀;取50µl进行检测。(稀释系数20)
8.4 饲料
取2±0.01g饲料加入8ml 60%甲醇水溶液,充分震荡混匀; 5000r/min离心10min;取2ml上清于离心管中,50-60℃水浴中,氮气流吹至剩余约0.5ml;用样本稀释液将总体积定容至3ml,充分震荡混匀;取100µl新的离心管中,加入400µl样本稀释液,充分震荡混匀;取50µl进行检测。(稀释系数30)
9    酶免分析步骤
9.1实验准备
9.1.1预先进行编号,标记标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测(每次实验都须做标准曲线)
9.1.2使用前将所有试剂回升至室温,取所需数量的微孔条,将多余板条用试剂盒提供的自封袋重新密封同时排除里面空气,并立即放回2-8℃干燥保存
9.2分析步骤
9.2.1在标准品孔中加入50µl各标准品溶液,在各样品孔中加入50µl样本溶液;
9.2.2在所有孔中加入50µl的三聚氰胺酶结合物溶液,轻微晃动反应板使之彻底混匀,室温下(20-25℃)温浴40min;
9.2.3甩干孔中液体,用洗涤工作液(250µl/孔)洗涤微孔板4-5次,最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体;
9.2.4洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl底物液A,再加 50µl底物液B,轻微晃动使之混匀;
9.2.5室温下(20-25℃)温浴15min,每孔中加入50µl终止液,混匀,在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。
10 结果计算
本试剂盒推荐配套使用快灵log/logit计算程序对检测结果进行定量换算。如果无该计算程序,请联系公司销售人员或致电公司。
11 试剂盒其他参数
本试剂盒液态奶检测下限为10ng/ml
本试剂盒奶粉检测下限为30ng/ml
本试剂盒酸奶检测下限为20ng/ml
本试剂盒饲料检测下限为30ng/ml
液态奶、奶粉、酸奶回收率均为90±15%
饲料回收率为80±15%
试剂盒板内变异系数小于8%,板间变异系数小于15%。
12 分析限制
本试剂盒检测为阳性的样品,应该用其他方法如HPLC加以确认。

 

常见问题及解答
问题一、加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低

可能原因
解决办法
未加入酶结合物
按照操作步骤重复实验
试剂盒未能充分回温
将试剂盒放在室温下(20-25℃) 回温后再进行操作(最少一个小时)
试剂盒已过有效期
请使用在有效期内
实验室室温太低(低于20 ℃ )
请提高反应温度至(20-25℃) ,若无法提高,请适当延长第一步温育反应时间 ,可将30min延长至40min)
未使用试剂盒中酶结合物、洗涤液等
请使用试剂盒中提供的物品进行实验,不同批号的试剂盒不能混用
终止试验后太久未判读
请在加入终止液后5min内判读
使用过的试剂盒未保存好
实验后未用完的试剂要放回2-8 ℃保存,未用完的酶标板要放到试剂盒提供的自封袋中与干燥剂一起密封保存在2-8 ℃
洗液配制错误
请使用试剂盒提供的洗液

 
问题二、标准曲线线性不佳,与试剂盒中质检报告的曲线不一致,或者重复性差

可能原因
解决方法
温育位置未避光或收到气流干扰
温育时不要直接暴露在强光下(日光等没有关系),也不要受到气流的干扰(如可在不通风的实验室)
操作时间拖太久
实验操作熟练后再进行实验,一旦开始实验就不要在中途离开
板孔间相互污染
加样时,要小心切勿溅出孔外,造成其他板孔的污染
加样量不准
移液器请校准,保持加样的准确性
加样时的操作放大不正确
 
洗涤过程不正确
洗涤时确保每个微孔加样量一致;每次洗涤时间不要太长(导致过度洗板),也不要太短(洗板不彻底),一般10s左右;洗涤步骤完成后立即进行下一步骤

 
问题三、背景值或吸光度(OD)过高

可能原因
解决方法
室温太高(大于25 ℃ )
保持实验室温度20-25℃,避免在热源或阳光直射处实验
底物溶液受到污染
若发现底物溶液已经变色,不要再使用
反应时间太长
请严格控制实验反应时间
酶结合物污染了试剂盒中其他试剂
使用过的吸头立即丢弃,每次吸取不同的试剂要更换新的吸头,凡是试剂(特别是酶结合物和底物)接触过的容器立即清洗干净
使用了质量差的水
尝试用蒸馏水配制溶液

 
问题四、一个或多个标准品数据点超出曲线范围

可能原因
解决方法
洗涤过程不正确
洗涤时确保每个微孔加样量一致;每次洗涤时间不要太长(导致过度洗板),也不要太短(洗板不彻底),一般10s左右;洗涤步骤完成后立即进行下一步骤
微孔中的试剂未充分混匀
试剂加完后,在振荡器上振荡混匀(没有振荡器可轻敲板四周或在桌面上做圆周运动使其充分混匀)
阴性标准品受到污染
严格按照试剂盒的操作说明进行实验
加入标准品和试剂的时间不一致
确保一切就绪,由低浓度到高浓度快速添加标准品并保证不被打扰
标准品添加顺序混乱或放置错误位置
按照说明要求重复试验并保证由低到高的顺序依次添加
标准品被污染或与其他标准品混淆
改用新标准品
标准品加样量不准
确保加样的准确性

  
问题五、板内及板间差异大

可能原因
解决方法
加入标准品和试剂、样品的时间不一致
尽可能排枪,中间不要间断
排枪使用不当
校准排枪检测吸嘴是否套紧,确保吸液量一致
洗涤系统出现故障
检测洗涤系统
不同批次的试剂混用
确保每个试剂盒不混用
板与板之间孵育时间差距过大
独立计时,确保一致的孵育时间

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