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猪病抗体快速检测卡在现代养猪保健中的作用
2012-11-09  点击数:

 

 

          在现代生产中,为减少的发生和流行,除加强的隔离消毒,减少环境中的病毒等生物安全措施外,还必须制定合理的免疫程序,使得猪体内长期保持抵抗强毒攻击的有效抗体,而要了解猪体内的有效抗体水平,就必须开展免疫抗体水平监测。目前对抗体水平检测方法许多,如 ELISA检测法、DOT-ELISA检测法和间接血凝法等,这些检测技术虽然具有微量、特异的优点,但需要条件较好、设备齐全的实验室和经过专门训练,具有较高的兽医微生物专业技术水平的人员操作,1次检测至少需要4个小时。检测程序繁琐,对操作人员要求专业性高,不适合基层兽医站和养殖场使用。 免疫抗体金标试纸条快速检测卡是建立在单克隆抗体的基础上,其检测结果的特异性及灵敏度大大提高,而且样品不必预处理,也大大降低了实验过程中的人为误差和工作强度;实际操作中只需要按照产品说明进行简单的操作,不需要任何仪器设备,已广泛应用在医学检验和农牧业生产中,适用于不同的检疫和诊断机构,更适合于基层兽医站及养殖场,为动物疫病的早期诊断和适时免疫提供了新的技术手段。

1、原理(以猪瘟为例说明)
   猪瘟抗体快速检测试纸采用酶联免疫原理和胶体金层折技术制成,快速检测猪血清(或血液)中的猪瘟抗体,将猪瘟抗原包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)上,兔抗猪瘟抗体包被在硝酸纤维素膜的质控线(C)上,用胶体金标记的猪瘟抗原干燥后置于玻璃纤维素膜下端。当血清加入加样孔内,由于层析的原理,血清开始沿纸条移动挡遇上干燥的金标抗原,将其溶解,并带着金标抗原继续往上移动,至硝酸纤维素膜的检测线。如果样品中有猪瘟抗体存在时,会与玻璃纤维素膜上的金标猪瘟抗原和包被在检测线上的猪瘟抗原,在检测线(T)上形成一个夹心的免疫复合物,呈一条紫红色线。样品中的抗体越高,色线颜色越深,判定为阳性。如果样品中没有猪瘟抗体,在检测线(T)上没有色带出现,判定为阴性。样品和金标抗原继续往上移至质控线(C)时,此处的兔抗瘟抗体将会同金标猪瘟抗原结合,在质控线(C)上形成一条紫红色线,证明本试纸有效。整个试验仅需5-20分钟。操作简便,快速,灵敏度高,准确率达98%以上,直观,结果肉眼判定。口蹄疫、伪狂犬、蓝耳病检测原理同猪瘟

2、抗体快速检测卡使用方法(以猪瘟为例说明)
2.1 操作步骤
2.1.1 在检测卡的加样孔内加入3滴待检的血清或血液样品。
2.1.2 将测试卡平放在桌面上,室温下静置5-20分钟,判断结果。超过30分钟,检测结果只能作为参考。
2.2 结果判定
2.2.1 阳性 在检测线(T)和质控线(C)同时出现紫红色线。猪瘟抗体滴度越高,检测线(T)的颜色越深;若检测线(T)出现的紫红色线颜色很浅,则说明为弱阳性。
2.2.2 阴性 只在质控线(C)出现一条紫红色线。
2.2.3 失效 在检测线(T)和质控线(C)都不出现紫红色线,视为失效。
2.3 诊断参数
2.3.1 当被检样品检测线(T)条带的色泽≥对照卡中猪瘟为1:16(口蹄疫为1:64,伪狂犬为1:40)效价时,说明检测样品牛猪瘟抗体的滴度较高,不需进行猪瘟疫苗接种免疫。
2.3.2当被检样品检测线(T)条带的色泽<对照卡中猪瘟为1:16(口蹄疫为1:64,伪狂犬1:40)效价时,说明检测样品中猪瘟抗体效价不能有效抵抗猪瘟强毒攻击,这时应该及时进行猪瘟疫苗接种。
2.3.3 当被检样品检测线(T)处无明显色带出现,说明检测样品中无猪瘟抗体或抗体水平很低。如果动物群体健康,应当及时进行猪瘟疫苗接种;如果动物群体中有个别动物出现疑似猪瘟病时,则可作为诊断猪瘟病的一个参考依据。
2.4 检测范围
2.4.1 外调须逐个检测,育肥猪按10%~15%比例抽检。
2.4.2 自繁检测,猪瘟效价应不低于1:32(口蹄疫为1:128,伪狂犬为1:80),抽检比例为10%~20%。
2.4.3出生首日至5日龄,测其母源抗体,首免后15-20天,二免后10-15天进行抗体检测,检测比例为3%-5%,猪瘟效价不能低于1:16(口蹄疫为1:64,伪狂犬为1:40)。
2.5 注意事项
2.5.1 检测卡从铝箔袋取出后应尽快使用,受潮后检测卡将失效。
2.5.2 检测卡应在4℃保存,可留存较长时间。室温下保存有效期为18个月。
2.5.3 口蹄疫、伪狂犬、蓝耳病抗体检测卡使用方法同猪瘟


3、检测卡在现代保健中的作用(以猪瘟为例说明)
3.1 检测卡可用于检验猪瘟疫苗的质量和确定免疫的最适剂量。如专业户或大型场购买大量量的猪瘟疫苗放在自己场里的冰箱冷冻层内,每次最好购买同一批号(一般以生产日期定批号)的猪瘟疫苗。可以从中取出一瓶疫苗,选择不同日龄的乳猪、小猪、若干头,分别应用2头份、3头份、4头份、5头份猪瘟疫苗进行免疫接种,免疫15天后采血,用抗体免疫金标检测卡测定抗体滴度。如果各组都能产生抵抗强毒攻击的免疫抗体时,则可以从中选择免疫头份少,抗体滴度高作为本批号疫苗最佳免疫剂量。如果检测的猪瘟抗体达不到强毒攻击的最低保护强度时,则应当检查是否是疫苗本身标题题目,还是猪群存在有免疫抑制病毒(如圆环病毒)的干扰。这时可以采取更换该厂家不同批号的猪瘟疫苗或另选厂家的猪瘟疫苗,再按上述方法进行不同剂量免疫,来确定是否是该批疫苗失效或是免疫抑制病毒的干扰,判定适宜的免疫剂量。
3.2 当母猪分娩时,用猪瘟抗体免疫金标试纸检测卡检测母猪的抗体水平。如果在试纸条上只出现1条色线(质控线C),说明母猪体内的猪瘟抗体滴度已低于抵抗猪瘟强毒攻击的最低保护强度,母猪应当及时进行猪瘟疫苗接种,同时乳猪应当及时采用超前免疫,以免发瘟病。如果试纸条上出现2条色线,说明猪体内的猪瘟抗体滴度较高,可以抵抗猪瘟强毒的攻击,就不需要进行超前免疫。因为可以通过初乳获得母源抗体,这时可以按照正常的免疫程序进行预防注射。
3.3 当从外地购进大量量的小猪或时,饲养主自己无法了解购买的小猪是否进行过猪瘟疫苗免疫或免疫是否有效,应使用检测卡。为了防止猪瘟病发生,选择什么时间再进行猪瘟免疫最适宜时,则可以根据不同地域、不同日龄的猪,选择有代表性的猪采血,应用猪瘟抗体免疫金标检测卡进行快速检测。通过检测结果,可以了解整个猪群猪瘟抗体的状况,以便决定是否及时开展免疫及选择适宜的免疫剂量,这样可以避免猪瘟病的发生。
3.4 在怀疑发瘟病时,可以采集病猪血清(或血液)用猪瘟金标检测卡检测。如果发瘟病,猪体血液中没有猪瘟抗体或抗体滴度很低。当然,发瘟而耐过不死的猪,抗体滴度可能会很高。
3.5 进行疫病监测时,可应用抗体免疫金标检测卡进行快速检测。如发瘟病时,常规的处理程序是全面隔离消毒和紧急预防注射。此时猪群特别是场的猪群的抗体滴度差异很大,紧急预防注射疫苗后的抗体滴度水平又会出现明显的差异。因此,还应当重新了解猪瘟抗体水平,以制定合理的免疫程序,确保的科学保健。

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