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猪口蹄疫鉴别诊断
2012-11-09  点击数:

 

    

        口蹄疫的临诊症状主要是口、鼻、蹄、乳头等部位泛起水疱。发疱初期或之前,猪表现跛行。一般情况下主要靠这些临诊症状可初步诊断,但表现类似症状的还有猪水疱病、猪水疱疹(SVE)、水疱性口炎(VS)。因此,终极确诊要靠实验室诊断。

    口蹄疫病原学诊断

    1.病毒分离鉴定 病毒分离鉴定的首选病料是未破裂或刚破裂的水疱皮(液),对新发病死亡的动物可采取脊髓、扁桃体、淋巴结组织等。将病料悬液冻融2次,4℃过夜(至少4h)浸毒。以3000r/min离心15min,除菌后取上清接种细胞。或加1/3体积氯仿混合摇振数分钟,以3000r/min离心15min,取上清液装入试管中,加棉塞,4℃过夜,氯仿挥发后,接种单层细胞。每份样品接种2~4瓶细胞,另设对照2~4瓶。37℃静止培养48~72h。天天观察记实,对照细胞形态应基本正常或少有朽迈。接种了样品的细胞如泛起FMD病毒典型病变(CPE),要及时掏出并置-30℃冻存。无CPE的细胞瓶要观察至72h,其后置于-30℃冻存作为第1代细胞/病毒液再盲传,至少盲传3代。凡泛起CPE的样品判断为阳性,无CPE的为阴性。为了进一步确定分离病毒的血清型,将泛起CPE的细胞/病毒液用间接夹心ELISA等检测方法定型。

    2.补体结合试验(CFT) CFT是根据抗原-抗体系统和溶血系统反应时均有补体介入的原理设计的,以溶血系统作为指示剂,限量补体测定病毒抗原。当病毒抗原与血清抗体发生特异反应形成复合物时,加入的补体因结合于该复合物而被消耗,溶血系统中没有游离补体将不发生溶血,试验显示阳性。

    3.病毒中和试验(VNT) 口蹄疫病毒血清型划分的依据是型间无交叉免疫保护性,VNT是型别鉴定的重要方法之一,其检测结果可靠,缺点是动用活毒,且用时较长,只能在专门的实验室中进行,无法推行于普通实验室。

    4.反向间接血凝试验 FMD反向间接血凝试验是将口蹄疫病毒抗体以化学方法偶联于醛化的绵羊红细胞上,当贴附于血细胞上的抗体与游离的抗原相遇时,形成抗原抗体凝集网络,绵羊红细胞也随之凝集,泛起肉眼可见的红细胞凝集现象。反向间接血凝试验可作为FMD病毒抗原型别鉴定的初步方法,该方法简便、快捷,适合于田间使用。目前该法仅在前苏联国家和我国使用,西方国家很少应用,也未列入国际推荐方法。

    5.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR) PCR具备实验诊断所要求的最重要的3个要素:①敏感,可将原样品放大上百万倍,使原本少得难以探察到的(Pg级)样本扩增到能在紫外灯下肉眼可见;②特异,核酸片断与引物间的序列互补,使反应呈高度特异;③操纵简朴快速。RT-PCR检测的目标物是FMD病毒的RNA,通常以病毒材料为被检样品,可对各种动物组织和细胞来源的病毒材料进行检测,扩增到的PCR片断测定核苷酸序列后,可以确定所属的基因型和基因亚型,进而追踪疫源。

    6.间接夹心ELISA 国际口蹄疫参考试验室建议,检测口蹄疫病毒血清型应优先采用间接夹心ELISA,OIE和FAO也一致推荐使用该方法定型诊断。

    7.现在有些企业自行研发了口蹄疫野毒感染抗体胶体金检测卡和口蹄疫免疫抗体胶体金快速检测卡,利用免疫法,可以在20分钟内快速有效区分野毒感染和免疫产生抗体及抗体水平。

    口蹄疫抗体检测
    通过检测动物体液中(主要是血清)特异性抗体,可对FMD病毒感染与免疫状况做出诊断,通常采用病毒中和试验和ELISA方法,这两种方法也是国际商业中指定方法。FMD病毒抗体检测可用于以下几个目的:①诊断急性感染,用统一试验检测急性期和康复期猪血清样品,血清抗体阴转阳或抗体滴度急剧上升表示发生了感染,但诊断的条件是猪无疫苗接种史;②证明猪未被感染,用于国际商业;③在流行病学调查中检测感染情况;④支持疫病扑灭计划和后期检测;⑤接种疫苗后效价测定。值得提示的是免疫猪有时抗体滴度很低,甚至检测不到抗体,但攻毒后仍能保护。

    口蹄疫新诊断技术进展
    FMD诊断检测技术正在不断地改进和立异,已从血清学诊断技术领域扩展到了分子生物学诊断技术领域。这些新技术的最大长处体现在简便、快速、精确、敏捷以及高通量化。

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