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农业部1077号公告:硝基呋喃代谢物检测方法
2013-01-04  点击数:

 

 

水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定

                                              ——高效液相色谱法

 

1 范围

    硝基呋喃代谢物检测标准规定了水产品中呋喃唑酮的代谢物3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)、呋喃它酮的代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)、呋喃西林德代谢物氨基脲(SEM)和呋喃妥因德代谢物1-氨基-2-内酰脲(AHD)残留量的的高效液相色谱测定方法。

    硝基呋喃代谢物检测标准适用于水产品中呋喃唑酮代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃西林代谢物和呋喃妥因代谢物残留量的测定。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682  分析实验室用水规格和试验方法

3 原理

试样中残留的硝基呋喃类代谢物用硝基呋喃类代谢物快速检测前处理试剂盒提供的试剂提取,经衍生化试剂衍生、经乙酸乙酯反萃、净化后用紫外检测器进行检测,外标法定量。

 

4 试剂和材料

硝基呋喃代谢物检测标准所用试剂应无干扰峰。除另有特别说明外,所用试剂均为分析纯;试验用水应符合GB/T 6682一级水的要求。

4.1  乙腈:色谱纯。

4.2  乙腈水溶液:乙腈+=30+70v/v

4.3  甲醇:色谱纯。

4.4  乙酸乙酯:色谱纯

4.5  异丙醇:色谱纯。

4.6  庚烷磺酸钠:HPLC级。

4.7  异辛烷:色谱纯。

4.8  乙酸:色谱纯。

4.9 10 mol/L氢氧化钠:称取固体氢氧化钠40 g,加水溶解冷却后,定容到100 mL

4.10 1 mol/L氢氧化钠:称取固体氢氧化钠4g,加水溶解冷却后,定容到100mL

4.11  标准品: 氨基脲(SEM)、3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)、1-氨基-乙内酰脲(AHD):99%。。

4.12  标准贮备溶液:准确称量各AMOZAHD AOZSEM10 mg,用甲醇分别定容于100 mL容量瓶中,配制成100 µg/mL的标准贮备液。

4.13  混合标准工作溶液:使用前,取4.10标准贮备溶液用甲醇稀释成所需浓度。

4.14  硝基呋喃类代谢物快速检测前处理试剂盒:内含提取剂1  20瓶、提取剂2  20瓶(20mL/瓶)、衍生化试剂2瓶、催化剂2瓶、净化柱C18-CN复合柱 20

5 仪器

5.1 高效液相色谱仪:配紫外-可见检测器。

5.2 电子天平:感量0.0001g

5.3 离心机:011000r/min

5.4 旋转蒸发仪。

5.5 可水浴加热超声波清洗机或恒温水浴摇床。

5.6 氮吹仪。

5.7 旋涡混合器。

6 液相色谱条件

6.1 色谱柱:CN柱,250 mm×4.6 mm(i.d.),粒度5µm

6.2 流动相:乙腈+异丙醇+乙酸乙酯+冰乙酸+0.05%庚烷磺酸钠=5+10+5+0.1+80V/V

6.3 流速:1.0 mL/min

6.4 柱温:25

6.5 检测波长:280nm

6.6 进样量:50μL

7 测定步骤

7.1 样品处理

7.1.1 取样

鱼,去鳞、去皮,沿脊背取肌肉;虾,去头、去壳,取肌肉部分;蟹、甲鱼等取可食部分,样品切成小块后,用打浆机打碎,均质混匀,备用。

7.1.2 提取

    准确称取已捣碎的样品10 g(精确到0.01 g),置于50 mL离心管中,先后加入提取剂110mL提取剂2,漩涡混合后于40摇床振摇或超声30min,于6000 r/min离心10 min;取出上清液,再加入10mL提取剂2,重复提取一遍,合并提取液于50mL离心管中。

7.1.3 衍生化

7.1.2 离心管中,加入衍生化试剂0.5mL及催化剂0.5mL后混匀,于40摇床振摇或超声60min,取出冷至室温。

7.1.4 反萃

将冷却后的上清液用10 mol/L1mol/L的氢氧化钠调pH7.0±0.1),加入15mL 乙酸乙酯萃取,4000r/min 离心后,取出乙酸乙酯层于梨形瓶中,再加入10mL 乙酸乙酯,重复上述操作两次,合并乙酸乙酯层,于35水浴中减压旋转蒸发至干,加入5%的甲醇溶液5mL 溶解残渣。

7.1.5 净化

将净化柱C18-CN复合柱依次用5mL甲醇、5mL水激活后,加入7.1.4溶液正压或负压以23mL/min速度过柱,流净后加5mL蒸馏水洗涤,挤干,弃去流出液,用2mL甲醇以23mL/min速度洗脱,接收全部洗脱液,40沙浴中氮气吹干。残留物用1.0 mL乙腈水溶液(4.2)及2mL异辛烷溶解,振荡混匀,5000r/min离心分离,取下层乙腈水层过微孔滤膜供高效液相仪器测定。

 

7.2 工作曲线

移取适量AMOZAHD AOZSEM混合标准溶液,在10mL 提取剂2中添加,分别使样品添加浓度为0.5µg/kg1µg/kg2µg/kg5µg/kg10µg/kg,按7.1测定步骤处理,样液用高效液相色谱仪测定,得出标准工作曲线。

7.3 色谱测定

根据样液中AMOZAHD AOZSEM的含量情况,选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中的AMOZAHD AOZSEM响应值均应在仪器的检测线性范围内。在色谱条件下,AMOZAHD AOZSEM的保留时间约为AMOZ 13.8minAHD 17.2min AOZ 20.7minSEM 22.0min

8 计算

样品中的AMOZAHD AOZSEM残留量按公式(1)计算。

 

 

                        ci×V

X=            …… (1)

m

 

X-样品中AMOZAHD AOZSEM残留量,μg/kg

ci -标准曲线上查出试样溶液中AMOZAHD AOZSEM标准工作溶液的浓度,μg/L

V-最终定容体积数,mL

m-供试试料样品重量,g

 

结果保留小数点后二位。

9 方法回收率

本方法AMOZAHD AOZSEM回收率为:70%~110%

10 方法检测限

硝基呋喃代谢物检测方法AMOZAHD AOZSEM的检测限均为1.0μg/kg

11 精密度

    两次平行测定结果相对标准偏差≤15%

12 方法的线性范围

    硝基呋喃代谢物检测方法的线性范围:硝基呋喃类代谢物混合标准溶液浓度为5ng/mL500ng/mL

 

 

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