真菌毒素检测综述

真菌毒素(mycotoxins) 是由真菌寄生于谷物或水果等农作物上,在适宜条件下产生的具有生物活性的一类物质。真菌和真菌毒素的广泛存在,严重影响农作物的产量,降低农产品和饲料品质,造成巨大经济损失。据悉,全世界每年由于霉变污染真菌毒素引起的农产品和工业原料的损失达数百亿美元。我国谷物霉变主要发生在北纬31°线即长江以南地区,每年使粮食减产3~7%。据调查,除粮食、饲料以外,在油料作物、种子、水果、干果、蔬菜、调味品、烟草、麻类、乳和乳制品、鱼虾、肉类、发酵产品等都发现了不同程度的真菌毒素污染。真菌毒素一般都是相对分子质量小的物质, 通常不被粮食谷物加工工艺或食品的烹调加热所破坏;所以在某种程度上比其他毒素如细菌毒素更危险。

粮食及饲料中真菌毒素的检测方法可以分为三类:

一类是生物学检测法, 包括种子发芽试验、呕吐试验等,很不利于快速检测,已很少采用;

一类是理化检测法,薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)。TLC虽然简便,但灵敏度差;HPLC虽然灵敏度高,但样品处理烦琐,操作复杂,仪器昂贵,标准品耗用大。

另一类是免疫化学检测法,如ELISA方法和胶体金免疫层析方法。ELISA法特别适宜大批样品集中检测,胶体金免疫层析方法适合现场单个或少数样品即时检测。

真菌毒素胶体金检测试纸基于抗原抗体的免疫原理,利用纳米胶体金层析技术,在真菌毒素的现场检测时具有以下优势:

1) 单个样品即可检测,无需仪器设备,特别适合现场检测;

2) 灵敏度高: 免疫层析法可检出量可达ng级,ELISA法最低检出量可达pg级,并可定量测定。

3) 特异性强:抗体抗原的免疫反应特异性很强,结构类似物、荧光物质、有色物质对检测的干扰很小,可检测样本本身颜色深的产品,如玉米。

4) 操作简便,反应迅速:由于特异性强,简化了样品的预处理和提取纯化过程,同时操作步骤也非常简便,5~10分钟即可判读结果。

5) 结果判读简单,通过判读胶体金出线情况即可肉眼识别结果,重复性高,不易产生人为误差。

6) 稳定性好:干法试剂,稳定性好,常温下可储存18个月,方便储存运输;

7) 安全性高,污染少,成本低廉,不需要昂贵的测定仪器,所用试剂也相对较少,特别是因为灵敏度高,毒素标准品的浓度可以很低,减少了对检测人员和环境的潜在危害和污染。      

以黄曲霉毒素B1快速检测为例,目前快检方法存在三种方法:

1、酶联免疫试剂盒Elisa;

2、胶体金快捷型---直接法;

3、胶体金精准型--萃取复溶法。

几种黄曲霉毒素B1快速检测方法对比
方法名称 优点 局限性 适用单位

黄曲霉毒素B1快速检测胶体金试纸卡快捷型---直接法

1、简便快速,5分钟出结果

2、样品处理时间非常短

3、携带方便,适用基层

4、可以单个样品逐一检测,不需要做曲线

5、无需复杂设备和专业知识,操作人员5分钟即可学会,即学即用

6、室温保存,保存期长

1、定性检测,只判断超不超标,不给具体数据

2、检测样品范围较窄,不能测含油较多的样品

3、用于提取的溶剂为甲醇,有一定的毒性

4、检测高灵敏度时稳定性弱于胶体金精准型

a.饲料生产加工企业

b.粮食谷物粗加工企业

c.工商质监部门用于快速筛查

d.畜禽养殖户自查

黄曲霉毒素B1快速检测胶体金精准型--萃取复溶法

1、与HPLC法对照,准确性非常好,有权威检测中心验证报告

2、检测样品范围非常广,凡是可能污染真菌毒素的样品(包括油类),均可用于检测

3、整个操作过程所使用的试剂均无毒无害

4、样本中毒素提取回收率高且稳定

5、样品本身颜色对检测结果影响小

6、可以通过调整稀释倍数准确地检测多个浓度梯度,可实现半定量检测

7、操作较简单,一般操作人员半小时即可学会,即学即用

8、室温保存,保存期长

1、定性检测,只判断超不超标,不给具体数据

2、操作时间比快捷型长

3、操作步骤多于快捷型

4、一张试纸只能测一份样品

a.粮油制品生产加工企业

b.食品加工贸易企业

c.香料调味品生产加工企业

d.食用油生产企业

e.国家/省市县级粮油监督检测中心(站)

f.工商质监部门用于市场快速筛查

g.饲料生产加工企业

h.其他需检测真菌毒素的行业

酶联免疫试剂盒Elisa

1、准确定量,有权威机构验证报告

2、批量样品,一次检测

3、采用直接竞争法,步骤简单

4、灵敏度高于胶体金法,检测范围广

5、检测值基本不受样品底色干扰

1、操作较复杂,需要专业人员操作

2、保存温度有限制,保存期一年

3、不适合基层现场检测

4、检测样品范围较窄,对于含油较多的样品,需另行设计样本处理方法

a.食品相关分析实验室

b.粮油监测检测中心

c.有条件的粮油饲料生产加工企业

真菌毒素常快速检测产品介绍
检测项目 快速检测方法 检测限和检测样品

黄曲霉毒素B1快速检测方法

黄曲霉毒素B1快速检测胶体金试纸卡(快捷型---直接法)

灵敏度:

    5ng

检测样本:

饲料、谷物、食用油、调味品、酱油、醋、发酵酒等

黄曲霉毒素B1快速检测胶体金试纸卡(精准型--萃取复溶法)

灵敏度:

    5ng

检测样本:

饲料、谷物、食用油、调味品、酱油、醋、发酵酒等

黄曲霉毒素B1快速检测酶联免疫试剂盒

灵敏度:

    1ng

检测样本:

饲料、谷物等

玉米赤霉烯酮快速检测方法

玉米赤霉烯酮快速检测胶体金试纸卡

灵敏度:

    60ng

检测样本:

饲料、谷物等

玉米赤霉烯酮快速检测酶联免疫试剂盒

灵敏度:     50ng
检测样本:

谷物、玉米、饲料等

呕吐毒素快速检测方法

呕吐毒素快速检测胶体金试纸卡

灵敏度:     100ng
检测样本:

饲料、谷物

呕吐毒素快速检测酶联免疫试剂盒

灵敏度:     100ng
检测样本:

谷物、玉米、饲料等

伏马毒素B1检测方法

伏马毒素B1快速检测胶体金试纸卡

灵敏度:

    200 ng

检测样本:

饲料、谷物等

T-2毒素快速检测方法

T-2毒素快速检测胶体金试纸卡

灵敏度:      100ng
检测样本:

饲料、谷物等

赭曲霉毒素A快速检测方法

赭曲霉毒素A快速检测胶体金试纸卡

灵敏度:     10ng
检测样本:

饲料、谷物等

真菌毒素常快速检测产品使用方法

样本准备:称取样品并加于配套的离心管中。

样品要求:

A、谷物粮食等固体样本需先粉碎至20目筛

B、油或是发酵酒等液体样本直接称取

样本前处理:
量取所需的萃取液,并加入到样品离心管中,振荡或离心。所得上层液体为含有检测物质的待检液。

如为精准型精确度高,需吹干此萃取液后复溶,充分提取待检物质。

样本检测:将未开封的试纸卡和检测样品恢复至室温。水平放置试纸卡,用滴管

吸取待检液,向试卡孔缓慢逐滴加入3滴不含气泡的检测液。

结果判读:5分钟判断结果,10分钟后的结果仅作参考。

阴性:C线显色,T线肉眼可见,无论颜色深浅均判为阴性。

阳性:C线显色,T线不显色,或者T线隐隐约约,判为阳性。

具体操作视频如下:

上海快灵生物科技有限公司黄曲霉毒素B1快速检测试纸卡操作指南---精准型

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上海快灵生物科技有限公司黄曲霉毒素B1快速检测试纸卡操作指南---快捷型

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检测过程中常见问题解答:

一、 检测卡加入样品后不出水:

原因:

1、加样速度太快。

2、机器压壳时不均匀。

解决方法:

1、加样时缓慢逐渐滴加

2、稍用力按卡片上压加样孔与检测窗中间部分。如右图:

二、 检测限量不准:

原因:

在吹干的过程中因为日光和太高温度容易使液体挥发或样本分解,导致检出值与实际不符。

解决方法:

在吹干时避免阳光直射,吹干过程中不要使用高温,吹干后待杯体恢复至室温后再加入复溶液。